E. S. P. O. CH
ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA
Aldaz Alex alexchristopheraldaztoala@gmail.com
6to Semestre
RIOBAMBA – ECUADOR
TEMA:
CROMATOGRAFÍA ASCENDENTE EN PAPEL DE AZÚCARES
2. OBJETIVOS:
2.1 General:
Realizar la cromatografía ascendente de azúcares, mediante el uso de papel filtro el cual contiene una muestra desconocida.
2.2 Específicos:
- Conocer la técnica de una cromatografía en papel.
- Calcular los factores de retención (Rf) para cada una de las muestras de azúcares.
- Identificar los diferentes azúcares utilizados, a través del cálculo de su factor de retención.
- Determinar la muestra desconocida mediante la cromatografía.
3. MARCO TEÓRICO
Fundamento
La cromatografía en papel se utiliza para compuestos muy polares o polifuncionales. El uso más común es para azúcares, aminoácidos y pigmentos naturales. En esta cromatografía se utiliza el fenómeno de partición en donde la fase estacionaria se halla sobre un soporte activo (el papel) que en realidad forma parte de la fase estacionaria que es el agua. Las fases móvil y estacionaria estarán en contacto en una gran interfase, lo que permite una rápida obtención de una distribución de equilibrio del soluto entre ellas. Si la muestra problema está formada por más de un soluto, éstos se separan por sus diferentes coeficientes de partición. La realización de la cromatografía en papel implica la siembra de la muestra problema en un trozo de papel de buena calidad, en general Whatman N°1 para cromatografía analítica, que luego se introducirá en una cuba de desarrollo de modo que el solvente (fase móvil) ascienda por capilaridad (técnica ascendente) o descienda por capilaridad y gravedad (técnica descendente). La fase estacionaria es un complejo celulosa - agua que tiene un poder diferente que el del agua pura.
Etapas de la cromatografía en papel
Siembra: Se aplican muestras en solución a no menos de 1,5 cm del borde inferior de una tira rectangular de papel, y a no menos de 1,5 cm de los bordes laterales, manteniendo a su vez, entre mancha y mancha una distancia no menor de 1 cm. Se hace un toque, se evapora el solvente, se hace otro toque, tratando de concentrar la muestra sin superar un diámetro de la mancha de 3 mm. La siembra es puntual para fines analíticos, y en banda para fines preparativos.
Desarrollo:
Ascendente: el solvente se coloca en el fondo de la cuba y el papel se suspende colocado en la parte superior de la cuba.
Descendente: el solvente se coloca en un depósito inerte ubicado en la parte superior de la cuba cromatográfica. En el fondo de la cuba se coloca también un poco de solvente para asegurar la saturación con el vapor. La parte superior del papel se sumerge en el disolvente y se tapa herméticamente la cuba (al igual que en la técnica ascendente). La siembra quedará en la parte superior del papel.
Bidimensional: se corre el papel en una dirección y luego del desarrollo y secado se gira 90° y se corre con otro solvente.
Revelado: Si los compuestos de la mezcla son coloreados, las manchas son visibles directamente. De lo contrario habrá que revelarlas.
Luz UV: si los compuestos absorben esta radiación las manchas se verán con fluorescencia. Reactivos de color: especiales para cada compuesto. Se deberá tener en cuenta que no se pueden usar reveladores que destruyan el papel como el ácido sulfúrico o el calor. Vapores de yodo sublimado: es un revelador universal.
Evaluación: Se efectúa el cálculo del Rf para cada componente de la mezcla por separado, que es característico de cada compuesto en condiciones constantes: soporte, temperatura, solventes, altura de desarrollo.
Figura 1. Esquema de la cromatografía ascendente en papel de azúcares.
Rf = Distancia recorrida por el compuesto desde el origen o punto de siembra/Distancia recorrida por el solvente desde el origen o punto de siembra.
El Rf toma valores entre 0 y 1 y puede ser usado para la identificación de los componentes de una muestra, siempre y cuando se trate de sistemas cromatográficos idénticos.
4. PROCEDIMIENTO
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
5.1 RESULTADOS
5.1.1 Resultado Práctico
Figura (1)
Figura(2)
En la Figura (2), se nota la presencia de los siguientes azúcares: Sacarosa, Maltosa, Glucosa, y Fructosa, luego de haberse realizado los cálculos respectivos.
5.1.2 Resultado del Cálculo
- Para la muestra problema:
Rf= x/y
Rf= 3.5/12
Rf= 0.29
- Para la muestra de glucosa:
Rf= x/y
Rf= 2.8/12
Rf= 0.23
- Para la muestra de fructosa:
Rf= x/y
Rf= 3.2/12
Rf= 0.27
- Para la muestra de maltosa:
Rf= x/y
Rf= 2.3/12
Rf= 0.19
- Para la muestra de sacarosa:
Rf= x/y
Rf= 2.7/12
Rf= 0.22
Según los resultados obtenidos, se puede notar que en la muestra problema también hay presencia de fructosa, en relación con el resultado de la muestra de fructosa.
5.2 DISCUSIÓN
Durante esta práctica la cromatografía ascendente de azúcares en papel llevada a cabo pudo permitir la identificación de los distintos azúcares utilizados, a través de su factor de retención (Rf). Razón por la cual se obtuvieron los siguientes valores: (0,29), (0,22), (0,19), (0,23) y (0,27); evidenciando de esta manera la presencia además de la “muestra problema”, sacarosa, maltosa, glucosa y fructosa respectivamente.
Cabe recalcar que la cromatografía se realizó usando papel filtro común y no uno de buena calidad (Whatman N°1); sin embargo se obtuvieron muy buenos resultados.
6. CONCLUSIÓN
- Este método de separación de mezclas complejas permite identificar los azúcares presentes en el papel cromatográfico.
- Por las determinaciones de los valores rf de la solución desconocida y la fructosa se observa que son próximos por lo que se presume que la solución patrón sea fructosa.
- Los valores de rf de las soluciones halladas en el rango de 0,30 menores a 1 (ya especificadas en resultados) que marcan la trayectoria que realiza el solvente desde su origen.
7. BIBLIOGRAFÍA
- file:///C:/Users/Usuario/Downloads/90529937-CROMATOGRAFIA-DE-AZUCAR.pdf
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